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局灶性脑缺血动物模型—血栓法简介

2020-3-14 17:24:20点击:
大脑中动脉(Middle cerebral artery, MCA)是人类脑卒中的多发部位,大脑中动脉闭塞(Middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型被普遍认为是局灶性脑缺血的标准动物模型,主要方法有血栓法、线栓法、电凝法和光化学法。
血栓法(autologous blood emboli)
1、复制方法
1)血栓的制作
SD大鼠,经腹腔注射水合氯醛(350~400mg/kg体重的剂量)或戊巴比妥钠(50~60mg/kg体重的剂量)麻醉后使大鼠仰卧位固定于手术台上,剪除手术区域毛发,皮肤常规消毒。切开左下肢皮肤。找到股静脉,穿刺抽静脉血0.5ml加入0.15ml凝血酶(200U加0.4ml生理盐水)后立即混匀,随后注入2根连续硬膜外麻醉导管内,静置15~20min。缝合完皮肤后,将导管内的血凝块用注射器缓缓移入生理盐水中,清洗2~3遍以去掉血栓表面的红细胞。在显微镜下观察,选择富含纤维素的血栓剪成14~18个2mm长的小段,然后将这些被选择的片段置于pH 7.4的磷酸盐缓冲液(或生理盐水)中。在磷酸盐缓冲液中静置4~5h,使其完成凝缩后,将血栓连同磷酸盐缓冲液一起吸入一根透明的连续硬膜外麻醉导管备用,注意避免导管内吸入空气。(也可在导管两端各接一装有生理盐水的注射器,使盐水反复通过导管冲洗血栓5min)。
2)鼠脑血栓模型制作
待血栓凝缩4h后,将大鼠再次麻醉,手术区域皮肤消毒。颈正中偏左切开皮肤,钝性分离出左侧CCA,ICA和ECA。结扎ECA的2个分支,穿2根线于ECA,将ECA远心端结扎。结扎ICA分支翼突腭动脉。动脉夹夹闭CCA和ICA,在ECA远端剪一“V”形切口,将22号套管针由ECA远端向近端插管。插管成功后拔出针芯,将插入的套管置入CCA分叉处,用线固定套管,将含血栓的透明导管用20号套管针芯连接于22号套管,松开颈内动脉夹,缓缓将导管内的血栓和磷酸盐缓冲液注入ICA(30s)后拔出套管。结扎ECA近心端,松开颈总动脉夹,缝合皮肤。整个操作过程注意保持大鼠体温,肛温保持在36~37℃。
2、模型特点
该模型产生了显著而持久的供血中断,并形成了范围恒定和边界清楚的梗死灶。在确定血栓注射入ICA后,造模成功率达80%以上。这种模型类似人类的自然梗死现象,手术创伤小,成功率高。血栓富含纤维蛋白,既适用于介入治疗和溶栓降纤治疗的研究,也适用于局灶性脑缺血药物保护机制的研究,以及血小板微血栓形成后的脑病理改变研究。该模型相对于线栓法和光化学法更贴近于临床上的脑栓塞。缺点是不易预见缺血部位和范围,不能再通,栓塞动脉对侧也可能受累,并可能导致外源性物质引起的炎症反应等。